黄芪丹参提取液对小鼠免疫系统的影响

２０１１年１月第８卷第２期　・论著・　黄芪丹参提取液对小鼠免疫系统的影响　罗千古　，周玖瑶　，李毓祺　，吴俊标　，余应嘉　（１．中山大学附属第五医院，广东珠海５１９０００；２．广州中医药大学，广东广州５１０００６）　【摘要］目的：研究黄芪丹参对小鼠免疫系统的药理作用，为临床应用提供实验依据。方法：将５０只健康ＫＭ小鼠分　为５个实验组，分别为空白对照组．阳性对照组，黄芪丹参高剂量组（１．００　ｇ／ｍ１）、中剂量组（Ｏ．５０　ｇ／ｍ１）、低剂量组　（Ｏ．２５　ｇ／ｍ１），连续灌胃给药１４　ｄ后，进行小鼠碳粒廓清试验，测定小鼠巨噬细胞的碳粒廓清指数Ｋ和吞噬指数仅；测　定小鼠脾脏系数、胸腺系数和肝脏系数。结果：黄芪丹参提取液可提高小鼠腹腔巨噬细胞的廓清能力和吞噬速度，提　高小鼠机体免疫能力。结论：实验证明黄芪丹参有增强小鼠免疫功能的作用。　【关键词】黄芪；丹参；碳粒廓清；免疫功能　【中图分类号】Ｒ９６８　［文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７３—７２１０（２０１　１）０１（ｂ）一０２３—０２　Ｅｆｌｆｅｃｔ　０ｆ　Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ　ａｎｄ　Ｓａｌｖｉａ　Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｍｉｃｅ　ＬＵＯ　Ｑ　帆　，ＺＨＯＵ　Ｊｉｕｙａｏ２，ＬＩ　Ｙｕｑｉ２，　ｕ　Ｊｕｎｂｉａｏ２，ＹＵ　Ｙｉｎｇｆｉａ２　ｆ１．Ｔｈｅ　Ｆｉｆｔｈ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｓｕｎ　Ｙａｔ－ｓｅｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｕｈａｉ　５　１　９０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１０００６，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ　ａｎｄ　Ｓａｌｖｉａ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：５０　ＫＭ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　５　ｇｒｏｕｐｓ：ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ，Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ　ａｎｄ　Ｓａｌｖｉａ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ（１．００　ｇ／ｍ１），ｍｅｄｉｕｍ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ（０．５０ｇ／ｍ１），ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｒｏｕｐ　ｆｇＯ．２５　ｇ／ｍ１）．Ａｆｔｅｒ　１４　ｄａｙｓ　ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　ｏｒａｌ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｃａｒｂｏｎ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｉｎｄｅｘ　ａｎｄ　ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ　ｉｎｄｅｘ．　Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｗｅｉｇｈ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ，ｓｐｌｅｅｎ　ａｎｄ　ｔｈｙｍｕｓ　ａｎｄ　ｃａｌｃｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｉｍｍｕｎｅ　ｏｒｇａｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ　ａｎｄ　Ｓａｌｖｉａ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｃｏｕｌｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｐｅｎｔｏｎｅ￣ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ａｎｄ　ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｃａｐａｃｉｔｙ，ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｍｉｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ　ａｎｄ　Ｓａｌｖｉａ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ＣａＤ＿ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｅ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｍｅｍｂｒａｎａｅｅｕｓ；Ｓａｌｖｉａ；Ｃａｒｂｏｎ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ；Ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｅｔｉｏｎ　肾病综合征以肾小球基底膜通透性增高为主的征候群，　１．２实验动物　其临床特征为全身水肿，大量蛋白尿，低蛋白血症和高胆固　醇血症，其中大量蛋白尿是最根本的变化ｌ１ｌ，现代医学多采用　ＫＭ小鼠，体重１８～２２　ｇ，购自广州中医药大学实验动物　中心，合格证号：ＳＣＫ（粤）２００８—０００１。　１．３仪器　激素及细胞毒药物治疗。但治疗中容易出现毒副作用及并发　症，且会复发。临床上已有用黄芪丹参注射液治疗肾病综合　征，黄芪丹参是具有广泛药理作用的中药，二者在肾病治疗　中应用广泛回。本实验通过研究黄芪丹参对小鼠机体免疫系　Ｔ６新世纪紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有　限责任公司生产；ＥＬ２０４型电子分析天平，梅特勒一托利多仪　器（上海）有限公司生产；Ｔ５００型电子天平，常熟市双杰测试　仪器厂生产。　２方法与结果　２．１方法　统的影响，探讨黄芪丹参的免疫作用，为临床治疗提供药理　学依据。　１仪器与试药　１．１药物　取６Ｏ只健康ＫＭ小鼠，１８－２２　ｇ，雌、雄各半，随机分为　５组，各１２只，分别为空白对照组，黄芪丹参水提液低剂量　黄苠、丹参，购自广州清平药材市场，由广州中医药大学　中药学院中药标本中心张秋镇老师鉴定．黄芪为豆科植物蒙　古黄芪Ａ　ｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｂｇｅ．ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ　组（０．２５　ｇ／ｍ１）、中剂量组（０．５０　ｇ／ｍ１）、高剂量（１．Ｏ０　ｇ／ｍ１）组，　金匮肾气丸阳性对照组，适应性喂养１周后，称重．每天灌胃　给药１次（０．２　ｍＶ１０　ｇ）。于第１４天给药后１　ｈ，对小鼠尾静脉　注射２０％墨汁（０．１　ｍＶ１０　ｇ），注射后立即计时，分别于２　ｒａｉｎ　和１２　ｒａｉｎ时从小鼠内眦静脉丛取血２０　ｌ，并将其加到２　ｒｎｌ　（Ｂｇｅ．）Ｈｓｉａｏ的干燥切片；丹参为唇形科多年生草本丹参Ｓａｌｖｉａ　ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　Ｂｇｅ．的干燥切片。黄芪和丹参加水煎煮３次，合并　煎液，过滤，浓缩至每１００　ｍｌ药液相当于原生药１００　ｇ，置　于冰箱备用；金匮肾气丸，北京同仁堂科技发展股份有限公　司，批号：０９３０１１３；中华墨汁，北京一得阁墨汁有限责任公　司。　【作者简介】罗千古（１９７０一），男，主管中药师；研究方向：中药药效机制。　［通讯作者】余应嘉（１９８５一），男，硕士研究生；研究方向：中药作用机理。　０．Ｉ％Ｎａ２ＣＯ，溶液中，在６８０　ｎｍ处测光密度值（ＯＤ），计算各　组廓清指数　值，然后将小鼠处死，取小鼠的肝脏、脾脏及胸　腺，并用滤纸吸干表面的血液，用电子天平称其重量，进行小　鼠脾脏系数、胸腺系数和吞噬指数ｄ的计算　。各数值按下列　公式计算：　ＣＨＩＮＡ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ巾国医药导报２３　・论著・　Ｋ＝（１ｇＯＤｌ—ｌｇＯＤ２）／（Ｔ２一ＴＩ）；其中ＯＤｌ和ＯＤ２：分别为两次　３讨论　２０１１年１月第８卷第２期　采血所测光密度；ＴｒＴ，为两次采血时问差。　ｏｒ．＝Ｋ　ｘ体重／（肝重＋脾重）　脾脏系数＝脾脏重量（ｒａｇ）／体重（ｇ）　胸腺系数：胸腺重量（ｍｇ）／９￣重（ｇ）　黄芪重要的有效活性成分为黄芪多糖（ＡＰＳ），通过对犬　脾脏Ｔ淋巴细胞Ｔｈｌ型和Ｔｈ２型细胞因子ｍＲＮＡ表达的整　体调节来促进细胞免疫　：丹参主要是通过它对细胞因子、抗　体及免疫复合物、免疫细胞的作用，发挥对免疫应答的内调　节作用目　、有研究发现，巾药黄芪和丹参不能提高ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、　肝脏系数＝肝脏重量（ｍｇ）／体重（ｇ）　２．２统计学方法　Ｔ细胞及ＣＤ４＋、ＦＯＸＰ３＋、Ｔ细胞的比例，但能提高ＣＤ４＋、　ＣＤ２５＋、Ｆ０ＸＰ３＋、Ｔ细胞的比例蚂．这提示其能促进ＣＤ４＋、Ｔ细　胞向着调节性Ｔ细胞分化，提高调节性Ｔ细胞／效应性Ｔ细　所有数据采用ＳＰＳＳ　１７．０软件进行统计学处理　计量资　料用Ｘ￣Ｓ形式表示．组问比较采用￡检验．以Ｐ＜０．０５为差异　有统计学意义，Ｐ＜０．０ｌ为差异有高度统计学意义。　２．３结果　２．３．１黄芪丹参提取液对小鼠免疫器官的影响与空白对照　组比较，金匮肾气丸阳性对照组，黄芪丹参水提液中、低剂量　组的脾脏系数、胸腺系数、肝脏系数比较有显著性差异（Ｐ＜　０．０１）；黄芪丹参水提液高剂量组脾脏系数、胸腺系数、肝脏　系数有最著性差异（Ｐ＜０．０５），上述结果表明。黄芪丹参水提　液能增加正常小鼠免疫器官的重量　见表１。　表１　黄芪丹参对小鼠免疫器官的影响（Ｈ＝１２，ｘ＿＋－ｓ　Ｔａｂ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ　ａｎｄ　Ｓａｌｖｉａ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｉｍｍｕｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｍｉｃｅ（ｎ＝ｌ　２，　±ｓ）　与空白组比较．　Ｐ＜Ｏ．０５．　Ｐ＜Ｏ．ｏ１　Ｃｏｍｐａｒｅ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｅｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．　ｐ＜（】．（１５．”Ｐ＜０．０１　２－３．２黄芪丹参提取液对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬廓清能力　和速度的影响与空白对照组比较，金匮肾气丸阳性对照　组．黄芪丹参水提液中、低剂量组的廓清指数与吞噬指数比　较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）．黄芪丹参水提液高剂量组亦有显　著性差异（Ｐ＜０．０５），表明黄芪丹参水提液能提高正常小鼠腹　腔巨噬细胞的乔噬廓清能力和速度。见表２。　表２黄芪丹参对小鼠碳粒廓清功能的影响（ｎ＝ｌ２。　±５）　Ｔａｂ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ　ａｎｄ　Ｓａｌｖｉａ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｃａｒｂｏｎ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｆｎ＝ｌ　２．　±　）　与空白组比较．　户　０．０５．　Ｐ＜ＯＯｌ　Ｃｏｍｐａｒｅ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．　Ｐ＜Ｏ　０５．　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１　２４巾营医药导攉ＣＨＩＮＡ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ　胞的比例，从而增强机体免疫能力。临床上黄芪丹参提取液　能有效治疗肾综合征出血热，能够有效的缩短尿蛋白消失的　时间，减轻肾损害，同时能改善血液流变学、血脂和微循环　。　因此，黄芪丹参提取液用于临床提高肾病综合征患者机体免　疫能力有一定的理论依据。　金匮肾气丸能显著降低慢性束缚致应激大鼠下丘脑１３一　内啡肽免疫反应强度：调节腺嘌呤合卵清蛋白致肾阳虚变应　性鼻炎大鼠血清Ｔｈｌ和Ｔｈ２细胞因子的表达。具有调节免疫　功能的作用，对部分免疫性疾病有一定的防治作用嘲。　实验结果显示，黄芪丹参水提液能显著提高正常小鼠腹　腔巨噬细胞的廓清指数和吞噬指数，增加免疫器官重量，说　明黄芪丹参提取液具有促进小鼠免疫功能的作用，可增强小　鼠体液免疫功能，提高小鼠体质，并呈明显量效关系。本试验　中黄芪丹参水提液有效成分黄芪多糖、黄芪苷、丹参酸、丹　参素等可能通过影响小鼠脏器淋巴细胞增殖反应、细胞因子　和细胞内信息分子的释放．促进小鼠的发育及脾脏组织形态　学变化；而高剂量的黄芪丹参提取液作用不如中低剂量原因　可能提取液浓度过高而抑制了机体的吸收。以上结果表明，　黄芪丹参提取液有提高机体免疫系统的作用。但黄芪丹参临　床应用丁肾病综合征的治疗作用和作用机制有待进一步研　究。　【参考文献】　『１１杜鹃黄芪与复方丹参注射剂联合治疗肾病综合征的疗效观察Ⅲ．黑　龙江医药科学　２００６，２９（１）：６０．　『２］肖利军，李爱平，郭金宝．肾病综合征应用黄芪和丹参联合治疗的临床　观察ｌ　Ｊ１．中外健康文摘，２００９，６（３）：６６－６７．　［３］才玉婷，李孟全，粱忆红，等．咳尔康ＬＩ服液对小白鼠碳粒廓清功能的影　响ｌ　Ｊ１．牡丹江医学院学报，２００９，３０（５）：１６—１７．　ｆ４】邱河辉，赵娟，刘凤华，等．黄芪多糖对犬脾淋巴细胞细胞因子ｍＲＮＡ表　达的影响ｌ　Ｊ】中国兽医杂志，２０１０，４６（６）：６—８．　［５］王启容．丹参对多种细胞固子调节研究『ＪＩ．中药药理与临床，１９９９，１５　（４）：３９—４１．　『６１董文毅，胡刚正，张博，等．黄芪等１２味中药在体外培养中对人调节性　Ｔ细胞分化的影响Ｉ　Ｊ１．世界华人消化杂志，１６（２４）：２７７０—２７７４．　［７］于春艳，董艳丽．丹参、黄苗联用治疗肾综合征出血热对提升血小板计　数减少尿蛋白的疗效观察…．中国实用医药，２００７，２（３３）：１１９．　ｆ８】王彩红，徐辉．黄芪和丹参注射液联用对早期糖尿病、肾病、肾功能的　影响［Ｊ１ｌ中国社区医师，２００９，１１（２１２）：１１０．　［９】刘妍，王蕾．六味地黄及金匮肾气方的现代药理研究进展叨．中华中医　药杂志，２００８，２３（１　１）：９９６—９９８．　（收稿日期：２０１０—１１－０３）